miR34a改变易瑞沙、吉非替尼获得性耐药的机制

  • A+
所属分类:吉非替尼
摘要

  研究 miR-34a 改变 易瑞沙 /吉非替尼获得性耐受药物的非小细胞肺癌 (NSCLC) 中 Axl 水平的调控机制。   方式   qRT-PCR和Western blot检查EGFR突变NSCLC细胞系中miR-34a、Axl、Gas6及相关下游讯号蛋白的表达;PC9-Gef-miR-34a 和 HCC827-Gef-miR-34a 细

研究 miR-34a 改变易瑞沙/吉非替尼获得性耐受药物的非小细胞肺癌 (NSCLC) 中 Axl 水平的调控机制。

miR34a改变易瑞沙、吉非替尼获得性耐药的机制

miR34a改变易瑞沙、吉非替尼获得性耐药的机制

方式

miR34a改变易瑞沙、吉非替尼获得性耐药的机制

qRT-PCR和Western blot检查EGFR突变NSCLC细胞系中miR-34a、Axl、Gas6及相关下游讯号蛋白的表达;PC9-Gef-miR-34a 和 HCC827-Gef-miR-34a 细胞是通过用 miR-34a 过表达病毒转染亲本细胞建立的,然后还对比了 PC9 中 Axl、Gas6 和下游通道相关蛋白的表达-Gef-miR-34a 和 HCC827-Gef-miR-34a 和耐受药物菌株。通过CCK8测定法测量细胞的存活率。荧光素酶报告基因检查 Axl 是不是 miR-34a 的靶标。最后,建立荷瘤裸鼠模型以验证体内miR-34a、Axl和Gas6 mRNA表达之间的关系。

结果

PC9-Gef和HCC827-Gef细胞系中Axl mRNA和蛋白、Gas6 mRNA和蛋白以及相关下游蛋白的表达水平高于PC9和HCC827亲本细胞系,而miR-34a的表达低于亲本细胞系。它在亲本细胞系中(P < 0.05)。PC9-Gef和HCC827-Gef细胞系中Axl mRNA和蛋白质、Gas6 mRNA和蛋白质以及相关下游讯号蛋白的表达高于PC9-Gef-miR-34a和HCC827-Gef-miR-34a细胞中的表达, 过表达 miR-34a (P < 0.05)。

结论

Axl 的 miR-34a 调控在 NSCLC 获得性易瑞沙/吉非替尼耐受药物中起重要作用,且它们的表达呈负相关,表明它们可作为 NSCLC 的预后标志物或潜在医治靶点。

尽管 TKI 的使用为部分 EGFR 突变的晚后期非小细胞肺癌患病者提供了良好的预后,但在临床实践中发现,大多数接受医治的患病者在 9 至 13 个月后出现不同阶段的耐受药物性。获得性耐受药物的机制尚不完全明白,目前公认的机制包括EGFR基因(T790M)外显子20的二次突变和MET基因的扩增。最新研究表明,Axl用于控制NSCLC的获得性TKI耐受药物。Anexelekto (Axl) 是受体酪氨酸激酶亚家族的成员。结合生长停滞特异性蛋白6(Gas6)能够激活其酪氨酸激酶活性并激活下游讯号转导通路,参与细胞粘附、增殖、凋亡等过程。虽然已经有一些研究探讨了Axl怎样在NSCLC中诱导TKI耐受药物的机制,但详细机制仍不明白。

在这项研究中,我们主要关注 miR-34a 对 Axl 的调控和下游讯号蛋白的表达。一个miRNA能够靶向多种mRNA来调节细胞增殖、分化、凋亡等生物学功能。发现如今易瑞沙/吉非替尼耐受药物细胞系中,亲本细胞和耐受药物株细胞中miR-34a、Axl和Gas6的表达呈负相关,Axl、Gas6与下游PI3K呈各向同性关系/AKT、MEK/ERK 和 JAK/STAT 相关蛋白。在吉非替尼耐受药物的细胞系中,当我们用慢病毒过表达miR-34a时,我们发现耐受药物株中Axl和Gas6的表达明显低于对照组,耐受药物株对吉非替尼的敏感性延长.当通过esiRNA处置下调Axl时,我们发现下游讯号蛋白的表达与对照组相比显着减少,细胞对吉非替尼的敏感性延长。

迄今为止,相关研究已发现miR-34a在多种肿瘤和细胞系中异常表达,包括神经母细胞瘤、肺癌和黑色素瘤细胞系。我们使用 Target Scan 生物信息学软件发现 Axl 是 miR-34a 的潜在靶标,进一步的双荧光素酶报告基因检查显示 Axl 是 miR-34a 的靶标。我们通过细胞实验证实了miR-34a和Axl之间的反比关系,然后建立了裸鼠模型。荷瘤裸鼠尾静脉注射表达miR-34a的慢病毒后,发现肿瘤体积较对照组明显变小;此外,通过免疫组织化学测量,下游途径中相关蛋白质的表达显着减少。结果表明,体内miR-34a的上调能够进一步提高吉非替尼耐受药物的NSCLC细胞对吉非替尼的敏感性。因此,

我们的研究有一些局限性。首先,由于时间限制,没有包括可以研究患病者生存和预后的临床标本。二是由于客观原理,案件数量较少。尽管如此,目前的结果首次表明 miR-34a 通过抑制 Axl 在抑制肺癌细胞生长中发挥重要作用。虽然我们推测 miR-34a 能够通过靶向 Axl 来抑制肺癌,但本研究仅分析了一种 miRNA 和一种 mRNA,可能还有其他 miR-34a 靶点或其他 miRNA 影响肺癌肿瘤的生长。因此,需要进一步的研究来证实这一假设。

总之,我们研究了 miR-34a 是否调节易瑞沙/吉非替尼耐受药物细胞系中的 Axl。我们发现失调的 miR-34a 能够通过 Axl 影响 PI3K/AKT、MEK/ERK 和 JAK/STAT 的相关下游讯号通路在体外和体内改变 NSCLC 的肿瘤发生和吉非替尼耐受药物性。因此,miR-34a 不仅能够作为医治靶点,还能够作为 NSCLC 的预后生物标志物。【微信:yaodaoyaofang】扫描下方二维码了解更多:

weinxin
微信咨询
这是我的微信扫一扫

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen: