吉非替尼(Gefitinib)逆转乳腺癌细胞对他莫昔芬耐药的机制

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所属分类:吉非替尼
摘要

  雌激素受体 (ER) 阳性乳腺癌患病者可能转为 ER 阴性并产生获得性耐受药物性,这会影响内分泌医治的治疗效果。本研究通过研究吉非替尼( Gefitinib )可使对他莫昔芬(TAM)耐受药物的 MCF-7 乳腺癌细胞(MCF-7/TAM)对 TAM 重新敏感的现象,验证了吉非替尼在内分泌医治

雌激素受体 (ER) 阳性乳腺癌患病者可能转为 ER 阴性并产生获得性耐受药物性,这会影响内分泌医治的治疗效果。本研究通过研究吉非替尼Gefitinib)可使对他莫昔芬(TAM)耐受药物的 MCF-7 乳腺癌细胞(MCF-7/TAM)对 TAM 重新敏感的现象,验证了吉非替尼在内分泌医治中能够逆转获得性耐受药物的作用,并进一步探索潜在机制。建立ERα阴性MCF-7/TAM细胞。在用吉非替尼处置细胞后,使用 RT-PCR 和免疫细胞化学检测了 ERα 和 ERβ 的 mRNA 和蛋白质水平,以及参与 MAPK 途径的分子的表达。RT-PCR结果显示,吉非替尼医治后MCF-7/TAM细胞中ERα和ERβ的mRNA水平上调;详细来说,ERα 重新表达,ERβ 表达上调。与 MCF-7 细胞相比,参与 MAPK 通路的分子(包括 RAS、MEK1/2 和 p-ERK1/2)在 MCF-7/TAM 细胞中的表达显着上调。吉非替尼医治后,MEK1/2和p-ERK1/2的表达水平显着下调。ERα 损失是 TAM 抗性的主要原理。吉非替尼主要通过上调 ERα mRNA 水平和诱导 ERα 重新表达来逆转 TAM 耐受药物性。MAPK 通路在 ERα 重新表达中起关键作用。MEK1/2和p-ERK1/2的表达水平显着下调。ERα 损失是 TAM 抗性的主要原理。吉非替尼主要通过上调 ERα mRNA 水平和诱导 ERα 重新表达来逆转 TAM 耐受药物性。MAPK 通路在 ERα 重新表达中起关键作用。MEK1/2和p-ERK1/2的表达水平显着下调。ERα 损失是 TAM 抗性的主要原理。吉非替尼主要通过上调 ERα mRNA 水平和诱导 ERα 重新表达来逆转 TAM 耐受药物性。MAPK 通路在 ERα 重新表达中起关键作用。

吉非替尼(Gefitinib)逆转乳腺癌细胞对他莫昔芬耐药的机制

吉非替尼(Gefitinib)逆转乳腺癌细胞对他莫昔芬耐药的机制

已经表明,将吉非替尼(Gefitinib)与内分泌医治相结合能够延缓耐受药物性的发展。此外,我们之前的研究表明,吉非替尼与 TAM 协同联合可抑制 MCF-7 细胞增殖。逆转化学疗法多重耐受药物性的研究表明,具有协同医治作用的药品在逆转化学疗法相应耐受药物性中起关键作用。我们之前发现,中药榄香烯 (ELE) 能够逆转乳腺癌细胞的 TAM 抗性,而 ERα 缺失是这些细胞中 TAM 抗性发展的主要原理。ELE 通过延长 ERα mRNA 水平来刺激 ERα 重新表达以逆转耐受药物性。此外,已知 MAPK 通路是参与 ERα 再表达的关键讯号通路。在本研究中,我们使用已建立的 MCF-7/TAM 细胞来研究吉非替尼是否能够逆转 TAM 耐受药物性并探索其潜在机制。

吉非替尼(Gefitinib)逆转乳腺癌细胞对他莫昔芬耐药的机制

ER 状态阳性是乳腺癌患病者内分泌医治的重要先决条件。该ER通过MAPK途径调节基因转录,和ER阴性乳腺癌细胞和抗性乳腺癌细胞成为ER阴性经常表现出活性MAPK讯号转导途径。然而,MAPK 上调介导的 ER 表达减少的潜在机制尚不明白。某些报告提出,MAPK 通路和 NF-KB 都有助于 ER 表达的丧失。吉非替尼已被证明可下调参与 MAPK 通路的分子的表达,我们的研究表明,低剂量的吉非替尼(Gefitinib)能够逆转 TAM 耐受药物性。我们还检查了 MAPK 通路分子的蛋白表达,包括 Ras、MEK1/2 和 P-ERK1/2ER,发现 M/T 组中 MEK1/2 和 P-ERK1/2ER 的表达水平较在 M0 组中观察到的表达水平。此外,吉非替尼医治显着减少了这些通路成分的蛋白质水平,表明吉非替尼可能通过改变参与 MAPK 通路的分子的表达来逆转 MCF-7/TAM 细胞的耐受药物性。吉非替尼还显示出上调 ERα mRNA 水平并诱导 ERα 重新表达。尽管这种药品也延长了 ERβ mRNA 水平,但 ERβ 表达与内分泌抵抗之间的关联仍不明白。参与MAPK途径的分子表达的变化影响ERα和ERβ的表达,ERα的重新表达主要使耐受药物细胞对TAM重新敏感。尽管 G10 组 ERβ mRNA 水平显着延长,但 ERβ 蛋白表达的变化是轻微的。此外,耐受药物细胞中的ERβ表达保持在较高水平。与 M/T 组相比,吉非替尼医治使 G10 组 ERα 和 ERβ 的 mRNA 和蛋白水平延长,并且 G10 组的 ERα/ERβ 比值也高于 M/T 组。因此,表现出较高 ERα/ERβ 比率的 G10 组重新获得了对 TAM 的敏感性。

在我们之前对 ELE 的研究中,我们以 ERα mRNA/ERβ mRNA 的比率作为标准,发现 ELE 处置产生的比率值大于 1,表明对 ERα mRNA 水平的影响是显着的。我们还发现吉非替尼医治产生的比值小于 1,表明对 ERβ mRNA 水平的影响也很显着7.ELE和吉非替尼医治均导致耐受药物性逆转,表明ERα蛋白的下调影响耐受药物性,而ERβ表达在耐受药物性中的作用尚不明白。事实上,ERβ 可能代表内分泌抗性细胞的新医治靶点,尽管需要进一步研究来研究这种潜力。此外,与我们之前对 ELE 的结果相比,本研究中吉非替尼医治后 ERβ mRNA 水平的变化显着高于 ELE 医治后观察到的变化。ERβ 表达不需要高 mRNA 水平。因此,有可能除了影响MAPK通路外,吉非替尼(Gefitinib)还参与了其他通路的转录调控;而且,ERβ 可能在耐受药物细胞的增殖中起重要作用。然而,关于 ERβ 在内分泌抵抗中的作用的报道一直互相矛盾。Gruvberger 等人发现,在 ERα 阴性乳腺癌患病者中,ERβ 表达作为独立的预后要素,这些患病者受益于 TAM 医治,重复发率显着减少。报道,ERα 以雌二醇 (E2) 依赖性方法激活 AP-1 位点的转录,并且在用抗雌激素医治后这种活性丧失。与 ERα 相比,ERβ 与 E2 的结合不会激活转录;相反,与 TAM 的结合会刺激 AP-1 位点的转录并诱导细胞增殖。霍奇斯等人提出 TAM 可能通过抑制细胞周期蛋白 D1 来阻断细胞增殖。此外,通过 ERβ 和 TAM 的结合刺激 AP-1 位点的转录被认为提供了解释 ERβ 表达怎样导致 TAM 抗性的机制。然而,Strom 等人在 T47D 细胞中诱导 ERβ 表达,发现 E2 和 TAM 都不能刺激细胞增殖。根据其它的报道,ERβ的低水平可能是TAM电阻的初步迹象。因此,这些不一致的结果表明 ERβ 在内分泌抵抗中的作用仍然没有定论,我们的研究也未能阐明 ERβ 对内分泌抵抗的影响。

转化为ERα阴性状态底层另一种机制是在ERα基因的启动子区CpG岛甲基化,除了组蛋白脱乙酰化。过度表达的组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 显示将 ERα 阳性 MCF-7 细胞转化为 ERα 阴性细胞,而 HDAC 抑制剂将这些细胞恢复到 ERα 阳性状态。此外,沉等人。发现 DNA 甲基化抑制剂可诱导 ER 阴性乳腺癌细胞在裸鼠中重新表达活性 ER。在我们的研究中,MCF-7/TAM 细胞表现出低水平的 ERα mRNA 和几乎完全没有 ER 蛋白表达。没有研究我们的实验中是否发生了 ER 基因沉默。因此,除了改变参与 MAPK 通路的分子的表达以刺激 ER 重新表达外,吉非替尼是否抑制 DNA 甲基化或抑制组蛋白脱乙酰化还需要进一步研究。

内分泌抵抗的潜在机制极其复杂,这为分析提供了许多途径。事实上,内分泌医治联合吉非替尼(Gefitinib)、拉帕替尼或依维莫司目前正在临床实验中进行研究,初步结果表明联合医治可能会改善接受医治的患病者的进展和临床收益。我们的研究表明,吉非替尼能够通过诱导 ERα 重新表达来逆转乳腺癌细胞中的 TAM 耐受药物性。在临床应用方面,我们的结果可能会让已经产生获得性耐受药物的患病者从重新接受内分泌医治中收益。因此,我们相信我们的研究将为内分泌医治提供新的医治靶点和策略。【微信:yaodaoyaofang】扫描下方二维码了解更多:

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